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在ELISA試劑盒中通常有3次加樣步聚，即加標(biāo)本，加酶物，加底物。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA試劑盒板孔的底部，防止加在孔壁上部，并留意不行濺起，不行發(fā)作氣泡。加標(biāo)本通常用微量加樣器，按規(guī)則的量參加板孔中。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴，以發(fā)作穿插污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。
有此測定(如間接法ELISA)需用稀的血清，可在試管中按規(guī)則的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中參加稀釋液，再在其參加血清標(biāo)本，然后在微型震動(dòng)器上震動(dòng)1分鐘以保證混和。加酶物使用液和底物用液時(shí)可用定量多道加液器，使加液進(jìn)程迅速完結(jié)。在雙抗體夾心法測定抗原時(shí)，如使用對于抗原分子上兩個(gè)不一樣抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體。
ELISA試劑盒則在測守時(shí)可使標(biāo)本的參加和酶標(biāo)抗體的參加兩步并作一步。這種雙位點(diǎn)一步不光簡化了操作，縮短了反應(yīng)時(shí)間，如使用高親和力的單克隆抗體，測定的敏感性和特異性也明顯進(jìn)步。單克隆抗體的使用使測定抗原的ELISA試劑盒進(jìn)步到新水平。